Josep de la Flor i Brú
Coordinador del TECDIAP de la SEPEAP
test de inmunofluorescencia negativo para gripe A y B
Las primeras pruebas diseñadas con esta técnica permiten la detección, mediante microscopio de fluorescencia, de antígenos de microorganismos a los que se han fijado anticuerpos específicos marcados con fluoresceína. Es una técnica que precisa instrumental de laboratorio, por lo que se escapa del concepto point of care. En la actualidad, hay nuevas técnicas de IFA, de alta sensibilidad/especificidad, diseñadas para ser valoradas sin microscopio, y en consecuencia accesibles para la utilización en Atención primaria como test de diagnóstico rápido (TDR). La IFA es un método de inmunodetección “en sandwich”: el anticuerpo (Ac) de detección en el tampón se une al antígeno (Ag) en la muestra, lo que forma complejos Ag-Ac, y se transfiere a la matriz de nitrocelulosa para ser capturado por el otro Ac inmovilizado en la tira de prueba. Cuanto más Ag hay en la muestra, mayor es el complejo Ag-Ac que se forma, dando lugar a una mayor intensidad de la señal de fluorescencia en el Ac de detección. El lector valora unos niveles de corte preestablecidos para ofrecer un resultado cualitativo. Por tanto, la IFA es un inmunoensayo que permite la detección cualitativa (positivo/negativo, ver figura) de distintos antígenos: estreptococo pyogenes, gripe A y B, VRS, neumococo, virus digestivos (rotavirus, adenovirus, norovirus) y otros gérmenes de menor interés en AP (dengue, Zika, HIV). Las muestras se obtienen con la misma metodología que la inmunocromatografía convencional: hisopo de frotis faríngeo para estreptococo, nasofaríngeo (o lavado-aspirado nasal) en gripe y VRS, y orina para neumococo. Su principal aportación es la valoración objetiva del resultado, sin depender de la visualización óptica de los “positivos débiles” frecuentemente obtenidos por inmunocromatografía. Su sensibilidad (para los tests respiratorios) depende, en gran parte, de la obtención de una muestra de calidad, en cuyo caso se aproxima a las técnicas de diagnóstico molecular. Los resultados se obtienen en franjas que oscilan entre los 3 y 15 minutos.
